文献来源：《中华眼底病杂质》

　　文献作者：曹亮 宋愈 吴莹 孙志敏 黄黎黎

　　目的：观察正常和缺氧条件下人参皂甙Rg3对人视网膜血管内皮细胞(HRCEC)增生、迁徙和管腔形成的影响。

　　方法：正常条件的培养基中，分别加人0.0、0.1、0.5mmol／L的人参皂甙R93，依序分为A、B、C 3个组；在150μmol／L。氯化钴缺氧条件的培养基中，分别加入0.0、0.1、0.5mmol／L的人参皂甙Rg3，依序分为D、E、F 3个组。在培养后24、48、72 h用噻唑蓝比色法检测HRCEC的增生；在24 h，用Transwell小室检测细胞迁徙，用基质胶检测细胞管腔形成，实时荧光定量逆转录酶链聚合反应和蛋白质免疫印迹法检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白质表达。

　　结论：人参皂甙Rg3可通过抑制HRCEC细胞增生、迁徙和管腔形成来抑制新生血管的形成，其机制可能通过抑制VEGF的表达来实现。

文献节选：

“2 结果

MTT比色法结果显示，各组问A值比较，差异有统计学意义(F正常组浓度=30.331，F缺氧组浓度=33.402， F正常组时间=85.462。F缺氧组时间=136.045，P均<0.05)。 正常或缺氧条件培养基中，均可观察到人参皂甙Rg3对HRCEC细胞增生的抑制作用，抑制作用呈浓度与时间依赖性(表1，2)。

 

 

Transwell小室结果显示，A、B、C、D、E、F组HRCEC细胞的移行细胞数分别为(103.33±3.54)、 (92.25±3.68)、(78.64±4.66)、(125.76±3.11)、 (90.27±3.55)、(77.81±5.01)个(图1)。各组间移行细胞数比较，差异有统计学意义(F正常组川fJ一 28．801，F缺氧组组问一117．594，P均<0.05)。正常或缺 氧条件培养基中，随着添加人参皂甙R93浓度的增加，HRCEC细胞的移行细胞数逐渐减少。

 

 

Matrigel 实验结果显示，A、B、C、D、E、F组HRCEC细胞的完整管腔形成数分别为(24.3±2.2)、( 15.7±1.7)、(10.1±2.3)、( 26.2±1.9)、( 15.1±2.6)、(8.6±1.9)个(图2)。各组间HRCEC细胞的完整管腔形成数比较,差异有统计学意义(F正常组组间35.364,F缺氧组组间=50.989,P均<0.05)。正常或缺氧条件培养基中,随着添加人参皂甙Rg3浓度的增加,HRCEC细胞形成的管腔相应减少。

 

 

 

实时荧光定量RT-PCR检测结果显示,A、B、C、D、E、F组HRCEC细胞的VEGF mRNA相对表达量分别为1.00±0.06、0.79±0.06、0.68±0.02、3.88±0.12、2.83±0.09、1.15±0.05(图3)。各组间VEGFmRNA表达比较，差异有统计学意义（F正常组组间=31.303,F缺氧组组间=682.668,P均<0.05)。正常或缺氧条件培养基中,随着添加人参皂甙Rg3浓度的增加，HRCEC细胞的VEGF mRNA均呈下降趋势,呈浓度依赖性。

 

Western blot检测结果显示,A、B、C、D、E、F组HRCEC细胞的VEGF蛋白质相对表达量分别为0.62±0.03、0.41±0.02、0.32±0.02、0.91±0.03、0.82±0.03,0.71±0.02(图4)。各组间VEGF蛋白质表达比较,差异有统计学意义(FE常组组间=125.471，F缺氧组组间=41.045,P均<0.05)。正常或缺氧条件培养基中,随着添加人参皂甙Rg3浓度的增加,HRCEC细胞的VEGF蛋白质表达均呈下降趋势,呈浓度依赖性。
 

 

王吉等发现人参皂甙Rg3能抑制胃癌细胞条件培养液诱导的血管内皮细胞增生,其机制可能是通过下调增生期血管内皮细胞相关因子受体的表达,使血管内皮细胞对肿瘤细胞分泌的生长因子的敏感度降低,从而影响血管内皮细胞的增生。我们的研究结果表明,正常或缺氧条件培养基中,均可观察到人参皂甙Rg3对 HRCEC细胞增生的抑制作用,这种抑制作用呈浓度与时间依赖性。

Shinkai等通过体外抗浸润试验表明,人参皂甙Rg3可以明显抑制小鼠肝癌细胞、黑色素瘤细胞、人小细胞肺癌和人胰腺癌细胞的单层浸润,推测人参皂甙Rg3还可以通过抑制内皮细胞的迁徙来抑制新生血管的生成。我们应用Transwell小室观察人参皂甙Rg3对HRCEC细胞移行的影响,结果表明,正常或缺氧条件培养基中,随着添加人参皂甙Rg3浓度的增加,移行细胞数均逐渐减少。

 

高勇等运用鸡胚绒毛尿囊膜方法观察了人参皂甙Rg3对体内新生血管模型的影响,结果发现人参皂甙Rg3可以对体内新生血管模型起到抑制作用。我们应用Matrigel实验观察人参皂甙Rg3对 HRCEC细胞形成管腔的影响,结果表明,正常或缺氧条件培养基中,随着添加人参皂甙Rg3浓度的增加,HRCEC细胞形成的管腔相应减少。

以上结果均表明,人参皂甙Rg3可以通过抑制HRCEC细胞增生,阻止细胞迁徙,抑制细胞成管﹐最终达到控制新生血管生成的目的。我们进一步研究了人参皂甙Rg3对HRCEC细胞VEGF的表达情况,结果表明,添加人参皂甙Rg3之后,正常或缺氧条件培养下,HRCEC细胞VEGF mRNA和蛋白质均呈下降趋势,且呈浓度依赖性。一般认为,缺氧条件诱导低氧诱导因子1(HIF-1)的表达，而HIF-1诱导VEGF的表达。但在我们的研究中,不管正常条件还是缺氧条件,添加人参皂甙Rg3后，HRCEC细胞VEGF的表达均下调。这提示,人参皂甙Rg3可以通过抑制内皮细胞表达VEGF来抑制内皮细胞参与新生血管的形成,但其机制与HIF-1-VEGF的信号传导通路可能不相关,而是直接拮抗VEGF的作用。

 

新生血管的形成机制是复杂的,限于时间及经费，我们的研究仅设立了2个干预浓度,观察指标和观察点也比较少。因此,人参皂甙Rg3对于HRCEC细胞周期的影响,对于细胞凋亡的影响,对于参与血管新生的其他细胞的影响,以及对其他的促血管新生因子和血管新生抑制因子的影响尚待进一步研究。”

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　　资料来源：万方数据