文献来源：《国际眼科杂志》

　　文献作者：曹亮  宋愈  吴莹  黄黎黎

　　目的：观察正常和高糖条件下人参皂甙Rg3对人视网膜血管内皮细胞血管新生作用的影响。
 

　　方法：在正常和高糖条件的培养基中,分别加入0.1mmol/L和0.5mmol/L的人参皂甙Rg3 ,在24h ,48h和72h用MTT检测细胞的增殖情况,用Transwell 小室检测细胞迁徙情况,用 Matrigel检测细胞管腔形成的情况,用实时定量RT-PCR和 Western-Blot 检测细胞中血管内皮生长因子mRNA和蛋白的表达情况。

　　结论：通过抑制VEGF的表达,人参皂甙Rg3可抑制人视网膜血管内皮细胞增殖、迁徙和管腔形成,进而抑制新生血管的形成。

文献节选：

“糖尿病视网膜病变( diabetic retinopathy , DR)是糖尿病的常见并发症,随着我国生活水平的提高,其发病率和致盲率也呈逐年上升趋势。目前,DR尚无有效的治疗方法,早期诊断并积极治疗以延缓其进展至关重要,玻璃体腔注射抗血管内皮生长因子( vascular endothelial growthfactor , VEGF)药物最近取得了一定进展,但远期效果尚有待进一步观察。人参皂甙Rg3是从中药人参中提取的有效单体成分,最早用于肿瘤的治疗,近年来,它的抗新生血管活性也逐渐受到关注。在本研究,拟将体外培养的人视网膜血管内皮细胞置于正常和高糖环境下,观察人参皂甙Rg3对其增生、移行、管腔形成和对VEGF表达的影响,为人参皂甙Rg3应用于糖尿病视网膜病变提供实验研究的支持。

⒉结果
2.1人参皂甙Rg3对HRCEC细胞增殖的影响

MTT比色法结果显示,无论在正常培养基中或是高糖培养基中，均可观察到人参皂甙Rg3对于HRCEC增殖的抑制作用，且呈浓度与时间依赖性(表1)。各组间A值差异有统计学差异(FE常组浓度= 30.306,F高糖组浓度= 37.054,F正常组时间88.569 ,F高糖组时间= 129.070,P<0.05)。

2.2人参皂甙Rg3对HRCEC细胞移行的影响

Transwell小室结果显示,A,B,C,D,E,F组 HRCEC细胞的移行细胞数分别为110.57±3.33,93.13±3.52,77.69±3.09 ,128.82土4.01 ,89.77±3.52,74.90±4.55个(表2,图1)。各组间移行细胞数比较,差异有统计学意义(F正常组组间三73.741 ,F商糖组组间=122.158,P<0.05)。无论在正常培养基中或是高糖培养基中,随着人参皂甙Rg3浓度的增加,移行细胞数逐渐减少。
 

2.3人参皂甙Rg3对HRCEC细胞管腔形成的影响

Matrigel实验结果显示,A,B,C,D,E,F组 HRCEC细胞的完整管腔形成数分别为28.0±2.5 ,19.3±2.3,14.1±2.1,26.2±1.8,14.8±2.1,8.1±1.9个(表3,图2)。各组间HRCEC细胞的完整管腔形成数比较,差异有统计学意义(F正常组组间=27.831 ,F高糖组组间= 66.935,P<0.05)。无论在正常培养基中或是高糖培养基中,随着人参皂甙Rg3浓度的增加, HRCEC细胞形成的管腔也相应减少。

2.4实时荧光定量RT-PCR实验结果
A,B,C,D,E, F组HRCEC细胞VEGF mRNA相对表达量分别为1.00±0.05,0.82土0.05,0.63土0.04,2.97±0.11,2.07±0.11 ,1.23土0.07(表4)。各组间VEGF mRNA表达比较,差异有统计学意义(F正常组组间=46.682 , F商糖组组间=234.186,P<0.05)。添加人参皂甙Rg3之后,无论是正常组或是高糖组,VEGF mRNA均呈下降趋势,且呈浓度依赖性。

2.5 VEGF蛋白质的表达

Western- Blot 实验结果显示:A,B,C,D,E,F组 HRCEC细胞VEGF蛋白质相对表达量分别为0.54士0.03,0.42±0.02,0.30土0.02,0.88±0.03,0.69土0.02,0.57土0.02(表5,图3)。各组间VEGF蛋白质表达比较,差异有统计学意义(F正常组组间=76.235,F商树组组间=129.353,P<0.05)。添加人参皂甙Rg3之后,无论是正常组或是高糖组,VECF蛋白质表达均呈下降趋势,且呈浓度依赖性。
 

本文从HRCEC细胞增殖、细胞迁徙和细胞内皮管腔形成进行了系列研究。结果发现,无论在正常培养基中或是高糖培养基中，均可观察到人参皂甙Rg3对于HRCEC增殖的抑制作用，且呈浓度与时间依赖性。王吉等研究发现: Rg3能抑制胃癌细胞条件培养液诱导的血管内皮细胞增殖,其机制可能是通过下调增殖期血管内皮细胞相关因子受体的表达,使血管内皮细胞对肿瘤细胞分泌的生长因子的敏感度降低,从而影响血管内皮细胞的增殖。罗贤令等发现，人参皂甙Rg3可抑制高糖下视网膜血管内皮细胞的增殖，本实验亦获得了与之相似的结果。
 

无论在正常培养基中或是高糖培养基中,随着人参皂甙Rg3浓度的增加,移行细胞数逐渐减少,提示人参皂甙Rg3可以减少细胞迁徙, Shinkal 等通过体外抗浸润实验表明, Rg3可以明显抑制小鼠肝癌细胞、黑色素瘤细胞、人小细胞肺癌和人胰腺癌细胞的单层浸润,推测Rg3还可以通过抑制内皮细胞的迁徙来抑制新生血管的生成。这羊,人参皂甙Rg3最终表现为抑制了内皮细胞管腔的形成,并且在浓度与时间上也表现出一定的依赖性。前已述及,影响DR的细胞因子有很多,限于条件,本研究仅选取VECF这一关键因子作为主要指标,结果发现人参皂甙Rg3具有抑制HRCEC细胞VECF蛋白和mRNA表达的作用。提示人参皂甙Rg3可能通过改变VECF的表达,从而在形态上影响内皮细胞成管行为。潘子明等和朱浩等认为Rg3是通过下调肿瘤细胞VEGF mRNA及蛋白质的表达,从而抑制肿瘤新生血管的形成。”

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　　资料来源：中国知网