试验单位：浙江省医学科学院省级实验动物与安全性研究重点实验室。
试验负责人：伏晓敏。
试验者：钱志坚、萨晓婴、乐俊仪等。
原始资料保存地点：浙江省医学科学院省级实验动物与安全性研究重点实验室。
一、摘要
人参皂甙Rg3 2500mg/kg、1250mg/kg和625mg/kg(7500、3750和1875mg/m²)对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核发生率分别为2.7%、1.6%‰和1.4‰，与阴性对照组的1.8‰无明显差异(P>0.05)，而阳性对照环磷酰胺组的微核发生率高达27.8%。人参皂甙Rg3 0.1、0.05、0.025mg/m1在加S9mix条件下，哺乳动物培养细胞(CHL)染色体畸变率与阴性对照组比较无显著性差异(P>0.05)，而阳性对照细胞环磷酰胺染色体畸变率则有显著性差异(P<0.01);在不加S9mix条件下，24hr和48hr收获的畸变率与阴性对照组比较无显著性差异(P>0.05)，而阳性对照丝裂霉素染色体畸变率则有显著性差异(P<0.01)。
人参皂甙Rg3 Ames试验采用5000、500、50、5ug/皿四个浓度，对TA97a、TA98、TA100、TA102四株标准菌在加或不加S9mix条件下，回变菌落数均与阴性对照组相似，而各阳性对照组的菌落数除TA98不加S9mix条件下为278外，其他均大于1000。上述微核试验、哺乳动物培养细胞(CHL)染色体致畸试验和Ames试验结果均为阴性，表明人参皂甙Rg3无致突变性。
二、试验目的
以微核试验、染色体畸变试验和Ames试验检测人参皂甙Rg3有无致突变性，为临床安全用药提供参考。
三、小鼠微核试验
1.试验药物
人参皂甙Rg3，含人参皂甙Rg3:(C42H72013)为标示量的90.0~110.0%，批号: 950510，由大连天富科技开发有限公司天然药物研究所提供。注射用环磷酰胺，白色结晶，规格200mg/瓶，批号: 950606，上海第十二制药厂生产。
2.动物
普通级ICR小鼠50只，体重26~30g，雌雄各半，由浙江省实验动物中心供应，动物质量合格证号:(94)008。
3.试验方法
将上述符合试验要求的50只ICR小鼠随机分为试验药物2500mg/kg[7500mg/m²(1/2最大耐受量)]、1250mg/kg[3750mg/m²(1/4最大耐受量)]、625mg/kg [1875mg/m²(1/8最大耐受量)〕三个剂量组、一个阴性对照组(1%CMC-Na溶液)和一个阳性对照组[环磷酰胺40mg/kg (120mg/m²)]，共五个试验组。每组10只，雌雄各半。受试药物用1%CMC-Na溶液分别配制成不同浓度等容量的混悬液。
小鼠空腹、间隔24小时连续灌胃2次，于第2次灌胃后6小时脱臼处死，取胸骨骨髓制成涂片，Giemsa染色，每只小鼠计数嗜多染红细胞1000个，计算微核发生的千分率。
4.试验结果与结论
人参皂甙Rg3对小鼠微核试验结果见表1。
上述结果表明，试验药物的三个剂量组和阴性对照组比较，小鼠微核发生率无显著性差异(P>0.05);而阳性对照组则明显高于阴性对照组，有显著性差异(P<0.01)。因此，在本试验条件下，人参皂甙Rg3对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核发生率无明显影响，检测结果为阴性。
4.哺乳动物培养细胞(CHL)染色体畸变试验
(1)受试药物人参皂甙Rg3，白色粉末，难溶于水、含量96%，批号:950208，由大连天富科技开发有限公司天然药物研究所研制提供。临用时用DMSO溶解后用蒸馏水10倍稀释备用。
(2)试验药物剂量
人参皂甙Rg3: 0.1、0.05、0.025mg/ml三个剂量;环磷酰胺: 4mg/ml;丝裂霉素: 0.02mg/ml。
人参皂甙Rg3剂量的确定以最大溶解度(0.1mg/ml)为依据。
细胞株:中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)株,浙医大病理生理教研室提供。
(3)试验方法
按《西药(新药)临床前指导原则》方法进行。CHL细胞用含20%小牛血清的DMEM培养液置于5% CO2培养箱中，进行单层细胞贴壁培养,经0.25%胰酶消化处理后制成细胞悬液(2~6×105/10m1/瓶)。该悬液培养增殖24hr后，在有或无代谢活化系统(S9mix)条件下，与受试药物人参皂甙Rg3接触。接触时间在有S9mix条件下为6hr，S9mix的加入量为0.5ml/瓶，用环磷酰胺作阳性对照;在无S9mix条件下，受试药物人参皂甙Rg3接触时间分为24hr和48hr两组，用丝裂霉素作阳性对照。另设S9mix对照、溶剂对照和空白对照。每组加入受试药物容量分别为0.1ml/10ml培养液/瓶，各剂量组平行做二瓶。在收集细胞前4hr，各瓶加入秋水仙素0.1ml(20ug/ml)，使细胞分裂停止在中期相。在药物与细胞接触24hr和48hr后分别收集细胞，用0.5%KCL低渗处理，固定，制片，Giemsa 染色，镜检，每剂量观察100个分散良好的中期细胞，记录染色体数目和结构变化,计算细胞畸变率(%)，作统计处理，评价人参皂甙Rg3的致突变性。
四、结果与结论
人参皂甙Rg3 0.025、0.05和0.1mg/ml 三个剂量组在加S9mix条件下，染色体畸变率分别为2%、3%和3%，与阴性对照(2%)比较无显著性差异(P>0.05)，而阳性对照环磷酰胺组高达21%，与阴性对照比较有显著性差异(P<0.01);在不加S9mix条件下，24hr收获的细胞畸变率分别为3%、2%和2%，48hr分别为3%、3%和4%，与阴性对照(3%)比较无显著性差异(P>0.05)，而阳性对照丝裂霉素高达20%，与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.01)，试验结果见表2。
上述结果表明在本试验条件下，人参皂甙Rg3哺乳动物培养细胞(CHL)染色体畸变试验结果为阴性。
五、Ames试验
(一)试验药物
同微核试验。人参皂甙Rg3用蒸馏水配制，试验浓度为5000、500、50、5ug/皿，外加阴性(蒸馏水)和阳性对照，采用标准平板掺入法试验在加或不加S9条件下进行。每个浓度平行做3个平皿。
(二)菌株
细胞株为四株组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌即TA97a、TA98、TA100、TA102，生物学鉴定合格。
(三)试验方法
采用标准平板掺入法，试验在加或不加S9mix条件下进行。
(四)试验结果与结论
各菌株回落数见表3。不同浓度受试药物的回变菌落数与阴性对照组相似，各阳性对照组相应菌株均呈强阳性反应，与阴性对照组比较有显著性差异。
人参皂甙Rg3 Ames试验结果为阴性。
