一、摘要
Beagle犬连续三个月口服人参皂甙Rg3高剂量30mg/kg/d(600mg/m²/d)和低剂量3mg/kg/d(60mg/m²/d)[分别相当于动物有效剂量(9mg/m²)的66.6倍和6.66倍]，未观察到其行为活动、饮食、眼、鼻等有任何异常;体重随月龄增加而增长，低剂量组犬体重增长比高剂量组犬多，第8、11周低剂量组犬体重增长明显快于高剂量组(P<0.05)，但给药组犬的体重增长与对照组相比，又无明显差异(P>0.05)。给药组犬的心电图检查、眼科检查、尿常规和血常规检查结果均在正常范围内，与对照组无明显差异;血液生化10项指标检查，除高剂量组有一犬停药次日检查时ALT、AST明显升高，停药后半个月恢复正常外，其他均在正常值范围内，与对照组相比无明显差异(P>0.05);大体尸解和病理组织学检查均未发现其脏器(24种)的外观和组织形态结构异常。结果表明，连续重复给予人参皂甙Rg3对Beagle犬未引起明显毒副反应。
二、试验目的
观察连续重复给予人参皂甙Rg3对犬所产生的毒性反应、出现的症状和严重程度，提供毒副反应的靶器官及恢复或发展情况，确定无毒性反应剂量，为拟定人用安全剂量提供参考。
三、受试药物
人参皂甙Rg3，含量96%，批号:950510，由大连天富科技开发有限公司天然药物研究所研制提供。
称取所需量，充填于胶囊内经口吞服。
四、动物
1.来源
Beagle犬，6~7月龄，体重4.5~5.2kg，雌雄各6只，每组雌雄各2只。由广州市医药工业研究所Beagle犬养殖场提供，动物质量合格证粤检证字9406。
2.饲养条件
按《狗的饲养程序SOP/GTX/208》进行饲养管理。Beagle犬养于不锈钢犬笼内，每笼一只，定量定时喂食。饲养配方:肉类30%、大米56.75%、玉米粉10%、骨粉2%、盐1%、矿补剂、多维素0.25%及少量鱼肝油，煮成粥，每天上下午各喂一次，每只每天约喂0.4~0.5斤。动物试验设施条件合格证:浙实验动物设施条件准字(94)101号。
五、剂量
因人参皂甙Rg3毒性低，小鼠口服最大耐受量大于5g/kg，故犬的长期毒性试验只设高、低剂量组和对照组。高剂量组: 30mg/kg/d(600mg/m²);低剂量组: 3mg/kg/d(60mg/m²/d)。按每犬每天剂量，用万分之一电子天平称取人参皂甙Rg3，装入胶囊内，每天上午喂食前经口吞服，对照组犬喂饲生理盐水与拟推荐临床给药途经一致)。每周给药6天，试验周期为三个月，按每周体重变化调整给药量。给药剂量以m²计，高、低剂量分别相当于动物有效剂量(9mg/m²)的66.6和6.66倍。
六、试验方法
根据“新药毒理学研究指导原则”中“狗的长期毒性试验”方法及GLP规范进行。试验前Bragle犬饲养一周，检测心电图，血液和血清生化指标，择其指标在正常值范围内的健康犬作试验动物。按《狗的鉴别和编号SOP/GTX/211》进行编号，雄犬为奇数，雌犬为偶数，按体重随机号分为高、低剂量组和对照组，每组4只，2雌2雄，平均体重无显著差异。
试验期间，每天上午观察记录犬的行为活动、恶心呕吐、流涎、尿、粪、食量等一般状况及体症。每周称体重一次，每天记录进食量。给药后1.5个月、停药次日和恢复期(半个月)结束后分别进行心电图、眼科检查及尿常规、血液和血清生化检查。检查前禁食12小时，不禁水，按《狗的血液采集程序SOP/GTX/519 》经股静脉采血，以F-800血细胞分析仪测定红细胞、白细胞、血小板、血红蛋白等。玻片法测凝血时间，血涂片镜检白细胞分类。血清以半自动生化分析仪及配对试剂盒测定AST、ALT、ALP、BUN、CRE、TP、ALB、GLU、T-BIL和T-CHO。在给药结束次日和恢复期结束后各处死一半犬作系统尸解和病理组织学检查，测定心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲状腺、睾丸、子宫、脑及前列腺的脏器系数;同时取肾上腺、胰腺、胃、十二指肠、回肠、结肠、垂体、前列腺、脑、脊髓、心、脾、胸骨、肾、肝、肺、淋巴结、膀胱、子宫、卵巢、睾九(连附睾)、甲状腺、胸腺和视神经作石蜡切片，HE染色，光镜观察作病理组织学检查。
七、试验结果
1.给药组和对照组 Beage 犬在90天试验期内始终未观察到活动、行为、饮食、大小便、眼、鼻、外生殖器等有任何异常，无一死亡。Beagle犬体重随年龄增加而增长，高低剂量组犬体重增长与对照组相比无明显差异(P>0.05)，但高剂量组犬体重增长比低剂量组少，第8、11 周高、低剂量组犬的体重增加有显著差异(P<0.05)见表1、图1。
2.给药组和对照组犬在试验期内，于给药前、给药1.5个月、停药次日和恢复期结束进行四次心电图检查均正常(见表2)、尿常规(蛋白定性、尿沉渣镜检)检查均正常(见表3)。
3.三组犬给药前、给药中期、给药结束和恢复期结束时进行四次眼科检查，其瞳孔反射、玻璃体、视网膜、视乳头盘等均正常。
4.常规血液学检查表明，连续服用人参皂甙Rg3三个月对 Beagle 犬的红细胞、白细胞、血红蛋白和血小板数、凝血时间及白细胞分类无明显影响(见表4)。
5.用半自动生化分析仪和配对试剂盒测定三组Beagle犬的血清ALT、AST、ALP、BUN、TP、ALB、GLU、T-BIL、CRE、T-CHO等10项生化指标的结果发现，停药次日高剂量组5082号犬ALT和AST升高，分别为3794.09nmo1/(S.L)和2483.83nmo1(S.L)，至恢复期结束时恢复正常，分别为445.09nmo1/(S.L)和144.69nmo1/(S.L);而对照组5080号犬AST在停药次日亦升高达6069. 55nmo1/ (S.L)。除此之外，给药前后，各组上述10项生化指标测定值虽有一定波动，但均在正常范围内，给药组与对照组相比，亦无统计学差异(P>0.05)，见表5。
6.三组Beagle犬在停药次日和2周恢复期末处死作系统尸解，肉眼观察其内脏和器官外观正常，均无充血、肿胀和坏死等异常表现;测定给药组犬与对照组犬的心、肝、脾、肺、肾、脑、肾上腺、甲状腺、子宫、卵巢、睾丸和前列腺各脏器系数，两者相比均无显著性差异P>0.05(见表6);
病理组织学检查给药组犬与对照组犬的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲状腺、脑、脊髓、垂体、胸腺、子宫、卵巢、睾丸(连附睾)、前列腺、胃、十二指肠、回肠、结肠、胰腺、膀胱、淋巴结、胸骨和视神经等组织形态，两者比较无明显差异，未发现组织萎缩、增生和炎性细胞浸润及细胞退行性变。上述结果说明Beagle犬连续三个月口服人参皂甙Rg3未引起上述24种脏器的组织形态结构异常(见照片)。
八、小结
Beagle犬连续三个月口服人参皂甙Rg3高剂量30mg/kg/d (600mg/m²/d)和低剂量3mg/kg/d (60mg/m²/d)[分别相当于动物有效计量(9mg/m²)的66.6和6.66倍]，其外观正常、行为活泼、体重增长、大小便正常；心电图、眼科检查、尿常规、血常规和血液生化学检查均在正常值范围内，大体尸解和病理组织学检查均未见异常。长期毒性试验结果表明，连续三个月重复给予人参皂甙Rg3对Beagle犬未引起明显毒副反应。
