试验单位：浙江省医学科学院省级实验动物与安全性研究重点实验室。
   
试验负责人：钱蓓丽、宣尧仙。
   
试验者：宣尧仙、陈国灿、何玲媛等。
   
原始资料保存地点：浙江省医学科学院省级实验动物与安全性研究重点实验室。

一、摘要

　　大鼠连续三个月灌胃给予人参皂甙Rg3高剂量30mg/kg/d (180mg/m²/d)和低剂量3mg/kg/d (18mg/m²/d)[分别相当于动物有效剂量3mg/kg (9mg/m²)的 20和2倍]，始终未观察到动物行为活动、饮食、体重增长、大便和皮毛色泽情况等外观体征有任何异常;给药组大鼠摄食量和饮水量高于对照组，高剂量组雄性大鼠从试验第5周起，体重增长比对照组快，但三组大鼠的体重增长并无明显差异(P>0.05；给药组大鼠的血常规和各项血液生化指标测定与对照组无明显差异，均在正常值范围内。大体尸解，24种脏器的外观正常，其病理组织学检查亦未见病理改变。结果提示，连续给予人参皂甙Rg3对大鼠无明显毒性反应。

二、试验目的

　　观察连续重复给予人参皂甙Rg3对大鼠所产生的毒性反应，首先出现的症状和严重程度，毒副反应的靶器官及其恢复和发展情况，确定无毒性反应剂量，为拟定人用安全剂量提供依据。

三、受试药物

　　人参皂甙Rg3，白色粉末，性质稳定(室温保存);含量96.0%，批号为950510;由大连天富科技开发有限公司天然药物研究所研制提供。

四、试验动物

　　1.来源

　　SD品系大鼠，6周龄左右，体重65~80克，60只，每组20只，雌雄各半。由浙江省实验动物中心提供，动物质量合格证为浙实验动物质量准字(94)008号。

　　2.饲养条件

　　按《大鼠的饲养管理程序SOP/GTX/207》进行。饲养于清洁级动物房内，中央空调通风15次/h，温度18~22℃，相对湿度50~70%，自然光照。大鼠雌雄分笼饲养，每笼5只，饲料为全价营养颗粒饲料，烘烤灭菌，由浙江省实验动物中心供应。饮水为城市自来水过滤除菌，饮水瓶给水。饲料和饮水自由摄取。动物试验条件合格证为浙实验动物设施条件准字(94)201号。

五、试验方法

　　按照“新药毒理学研究指导原则”中“大鼠长期毒性试验”要求及GLP规范进行试验。因本品毒性较低，小鼠口服最大耐受量>5g/kg(15g/m²)，故本试验受试药物只设高低二个剂量组。按“大鼠鉴别与编号SOP/GTX/210”对60只大鼠进行编号，雄为奇数，雌为偶数，按体重随机号分为高、低剂量给药组和对照组三个组，每组20只，雄雌各10只，各组平均体重无显著差异。人参皂甙Rg3高剂量30mg/kg/d(180mg/m²/d)和低剂量3mg/kg/d (18mg/m²/d)[分别相当于动物有效剂量3mg/kg(9mg/m²)的20和2倍];对照组喂1%CMC-Na溶液1m1/100g/d。高、低剂量组均以1%CMC-Na溶液将人参皂甙Rg3配制成所需浓度混悬液;按1m1/100g/d灌胃给药(与临床拟用药途径一致)，每天一次，每周给药6天、试验周期为三个月，每周称体重一次，并按体重调整给药量，用等容量不等浓度溶液给药。

　　试验期间，每天上午观察记录大鼠外观体征、行为活动，粪便性状等。每周称体重一次，并记录每周摄食量和饮水量。停药次日和恢复期结束时各进行血常规和血液生化指标测定。大鼠禁食12小时，按《大鼠血样采集程序SOP/GTX/218》进行采血。以F-800血细胞分析仪测定红细胞、白细胞、血小板、血红蛋白;血涂片镜检白细胞分类;玻片法测凝血时间;血清以半自动生化分析仪及配对试剂盒测定AST、ALT、ALP、BUN、CRE、ATP、ALB、GLU、T-BIL和T-CHO。在停药次日，各组处死大鼠12只，余下动物于恢复期(2周)结束后处死，做系统尸解和病理组织学检查。测定心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲状腺、睾丸、子宫、脑、前列腺的重量并计算脏器系数。同时取肾上腺、胰腺、胃、十二指肠、回肠、结肠、垂体、前列腺、脑、脊髓、胸骨、心、脾、肝、肾、肺淋巴结、膀胱、子宫、卵巢、甲状腺、胸腺、睾丸(连附睾)和视神经做石蜡切片、HE染色，进行病理组织学检查。

六、试验结果

　　1.试验期内始终未观察到服用人参皂甙Rg3的大鼠与对照组大鼠的行为活动、饮食、大便和皮毛色泽情况等外观体征有任何异常，无一死亡；大鼠体重随周龄增加而增长，高剂量组雄性大鼠从5周起体重增长比对照组多，但三组体重随周龄增长并无显著性差异(见表1)。

　　三组大鼠的每天平均摄食量和饮水量随周龄增加而增加，人参皂甙Rg3高剂量组大鼠第5、6、7、8、12周的平均摄食量明显高于对照组(P<0.01)，第2、7、10、11 周的平均饮水量也高于对照组(P<0.05);人参皂甙Rg3低剂量组大鼠第2、3、5、9周每天平均摄食量和第周的平均饮水量明显高于对照组(P<0.05)，见表2。

　　2.常规血液学研究表明，连续给予人参皂甙Rg3对大鼠的红细胞数、白细胞数、血红蛋白量、血小板计数、白细胞分类和凝血时间均无明显影响，虽然各给药组大鼠血红蛋白量和血小板数高于对照组(P<0.01,P<0.05)，但均在正常范围内(见表3)。

　　3.人参皂甙Rg3高低剂量组与对照组大鼠血液生化指标测定结果表明，连续重复给予人参皂甙Rg3三个月对大鼠的血清ALT、AST、ALP、BUN、TP、ALB、GLU、T-BIL、CRE、T-CHO均无明显影响，测定值均在正常范围内(见表4)。统计分析，高低剂量组大鼠停药次日的 AST明显低于对照组(P<0.01，P<0.05)，而GLU和T-CHO明显高于对照组(P<0.05)，停药半个月后这三项指标的测定值三组间无统计差异(P>0.05)。其他生化指标，各组间均无统计差异(P>0.05)。

　　4.各组大鼠停药次日和恢复期结束后处死，进行系统尸解，肉眼观察各脏器，均无充血、肿胀和坏死等异常表现。心、肝、肾、脾、肾上腺、甲状腺、睾丸、卵巢、子宫、脑和前列腺称重，计算脏器系数(表5)。高剂量组雄大鼠的肺脏器系数明显高于对照组(P<0.05)，而停药半个月后，与对照组相比，无明显差异(P<0.01)，低剂量组雄大鼠脾的脏器系数明显低于对照组(P<0.05)，而停药半个月后，给药组肺、脾脏器系数与对照组相比，均无显著差异( P>0.05)。其他脏器系数与给药组相比，无明显差异(P>0.05)。

　　病理组织学检查结果发现，人参皂甙Rg,高低剂量组大鼠的心、肝、脾、肾、肺、肾上腺、垂体、前列腺、胸腺、睾丸(连附睾)、卵巢、子宫、胃、十二指肠、回肠、结肠、胰腺、膀胱、淋巴结、脑、脊髓、胸骨(骨和骨髓)、视神经等组织形态结构与对照组大鼠比较无明显差异，未发现组织萎缩、增生、炎性细胞浸润及细胞退行性变(参见照片)。但给药组和对照组有几只大鼠部分肝细胞胞浆淡染和肝窦间隙轻度扩张充血、肾脏皮质和髓质小血管轻度充血、肾上腺皮质和髓质小血管轻度充血、脾脏红髓亦轻度充血，但组间并无显著差异，均因处死时动物挣扎所致。

七、小结

　　大鼠连续三个月灌服人参皂甙Rg3高剂量30mg/kg/d (180mg/m²/d)和低剂量3mg/kg/d (18mg/m²/d)[分别相当于动物有效剂量3mg/kg(9mg/m²)的20和2倍]，始终未观察到动物的行为活动、饮食、大便和皮毛色泽情况等外观体征有任何异常，体重增长正常，无一死亡。给药组大鼠的血液学和血清生化学指标检查结果与对照组无明显差异，均在正常值范围内。病理解剖24种脏器的外观正常，病理组织学检查均未见异常。结果提示，连续3个月给予人参皂甙Rg3对大鼠未引起明显毒性反应。

参考文献

　　[1]新药(西药)临床前研究指导原则汇编.中华人民共和国卫生部药政局1993.P199.

　　[2]施新猷:医学动物实验方法.北京.人民卫生出版社1979，p268.