试验单位:浙江省医学科学院省级实验动物与安全性研究重点实验室。
试验负责人:钱蓓丽、宣尧仙。
试验者:聂朝辉、何良强、陈国灿等。
原始资料保存地点:浙江省医学科学院省级实验动物与安全性研究重点实验室。
一、摘要
人参皂甙Rg3高剂量30mg/kg/d (180mg/m²/d)、中剂量15mg/kg/d(90mg/m²/d)和低剂量7.5mg/kg/d (45mg/m²/d)[分别相当于动物有效剂量(9mg/m²)的20、10、5倍]对大鼠的致畸敏感期毒性试验结果表明:三个给药组对孕鼠体重增长、活胎仔数、活胎仔体重和性别均无明显影响,对胎仔各器官也无影响,胎仔外观正常、无畸形,其内脏和骨骼的生长发育正常,与阴性对照组无差异;而阳性药乙酰水杨酸对大鼠有明显的胚胎毒性和致畸性。因此,人参皂甙Rg3对大鼠无明显胚胎毒性和致畸性。
二、试验目的
了解人参皂甙Rg3有无胚胎毒性和潜在致畸性,为临床安全用药提供参考。
三、受试药物
人参皂甙Rg3.含量: 96%;批号:950510,保存于密闭的棕色玻璃瓶内,室温存放,由大连天富科技开发公司天然药物资源研究所研制提供。
乙酰水杨酸,白色结晶,保存于室温,含量95%以上,浙江省医学科学院药物研究所合成室提供。
四、动物
健康性成熟的SD大鼠,雌性100只,体重230±1g ,雄性50只,体重280±1g,由浙江省实验动物中心供应,动物质量合格证号:(94) 008;饲养于具有中央空调(通风8~15次/小时)、集中通风的实验室内,其温度20±1℃,相对湿度50~65%,自然采光。
五、试验方法
取150只符合上述要求的SD大鼠,按二雌雄合笼交配,每天早上阴道涂片检查精子,检出受孕鼠。每天检出的受孕雌鼠,按下述剂量组平均随机分配,每剂量组受孕鼠为20只。
第一组:人参皂甙Rg3,30mg/kg·d (180mg/m²/d)×10d;
第二组:人参皂甙Rg3,15mg/kg-d (9 0mg/m²/d)×10d;
第三组:人参皂甙Rg3. 7.5mg/kg-d (45mg/m²/d)x10d;
第四组:乙酰水杨酸,250mg/kg-d (1500mg/m²/d)x10d(阳性对照组);
第五组:1%羧甲基纤维素钠, 1ml/100g .d x 10d(阴性对照组)。
每剂量组孕鼠检出精子的当天作为受孕0天,于大鼠受孕第6~15天,分别给予不同剂量的人参皂甙Rg3、乙酰水杨酸及1%CMC-Na;孕鼠于受孕第0、3、6、9、12、15、18、20天各称体重一次,随体重变化调整剂量。各剂量组的人参皂甙Rg3和乙酸水杨酸用1%CMC-Na溶液配制成不同浓度等容量的混悬液,供孕鼠灌胃,各组灌胃容量相同。于受孕第20天将孕鼠颈椎脱臼处死,剖检,子宫连胎仔称重,记录着床数、胎仔数、活胎、死胎、早期和晚期吸收胎数、卵巢黄体数。取出胎仔及胎盘称重,检查胎仔性别及有无外观畸形,测量每只胎鼠的身长、尾长。
将每窝1/2胎鼠放入Bouin液固定,作徒手切片,检查内脏畸形(腭、鼻、眼、脑、心肺、肝、脾、胃肠、肾、生殖器);1/2胎鼠剥皮,除去颈和两肩甲骨之间的脂肪,取出内脏后放入茜素红染液中染色,3天后放入透明液A,经2天再放入透明液B,以备骨骼(包括头颅骨、胸骨、肋骨、脊椎、前后肢和其他骨骼)检查,检查骨化程度、变异和畸形等。以母鼠妊娠体重变化、平均黄体数、着床数、活胎数、着床后胚胎死亡率、活胎体重、性别比、外观、骨骼及内脏畸形的胎鼠数及畸形率与阴性对照组比较,进行统计学处理,评价试验结果。
六、试验结果
1.给孕鼠灌服人参皂甙Rg3 30、15和7.5mg/kg (180、90、45mg/m²)剂量后,均未见任何不良反应,见表1。
2.人参皂甙Rg3 30、15、7.5mg/kg (45mg/m²)剂量在各孕期对孕鼠体重均无影响,与阴性对照组比较无显著差异(P>0.05);而乙酰水杨酸组在受孕第15~20天时,其体重与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.01)。胚胎吸收率:阴性对照组为5.9%,人参皂甙Rg:三个剂量组分别为5%、5.6%和0,而乙酰水杨酸组为15.8%;全部着床胎仔吸收率:阴性对照组与人参皂甙Rg3三个剂量组均为0,而乙酰水杨酸组为15.8%,见表2、3。
3、人参皂甙Rg3各剂量组对胚胎性别、体重无影响,与阴性对照组比较无显著性差异(P>0.05),但人参皂甙Rg3 15mg/kg 剂量组胎仔体重与对照组胎仔体重相比有显著性差异(P>0.05),这可能与每窝胎仔数量多少有关;而乙酰水杨酸组与阴性对照组比较,胎仔体重有显著性差异(P<0.01,P<0.001),见表4。
4.人参皂甙Rg3各剂量组和阴性对照组胎仔未出现畸形;而乙酰水杨酸组则出现胎仔头面和身体的畸形,主要表现为露脑、脊椎裂、缺尾,其畸变率分别为5.4%、3.6%、0.6%,见表5。
5.人参皂甙Rg3各剂量组对胎仔内脏发育无影响,与阴性对照组比较无显著性差异(P>0.05);而乙酰水杨酸组对胎仔内脏发育有明显的影响,主要表现为侧脑室扩大、无脑、缺肾,发生率分别为52.5%、6.1%、1.2%,见表6。
6、人参皂甙Rg3各剂量组对胎仔骨骼的生长发育也无明显影响,与阴性对照组比较均无显著性差异(P>0.05);而乙酰水杨酸组对胎仔骨骼的生长发育有明显的影响,主要表现为颞骨、蝶骨、颧骨和胸骨的骨化不全和未骨化,但对其他骨骼未见明显影响,见表7和表8。
七、小结
对大鼠的上述致畸敏感期毒性试验结果表明,在本试验剂量条件下,人参皂甙Rg3未见胚胎毒性和致畸性。
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